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【求助】SEC-HPLC中遇到的问题
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各位虫子们，我最近在做方法验证－－SEC-HPLC检测蛋白样品中高分子杂质，柱子是TSK SWxl3000，流速0.6min/ml，样品出峰时间在～15min，HPLC是手动进样。 1. 在耐用性研究中，检测样品在室温的稳定性，将样品放在室温24h，对样品进行检测，发现在21min出现一降解峰。 2. 之后开始检测限实验，就发现每一针都在21min出现一个峰，怀疑是柱子吸附蛋白，冲洗柱子后，依然在21min出峰；怀疑进样阀不干净； 3. 冲洗进样阀后，直接将进样阀有Load转到Inject，什么样品都不进，结果基线平稳，无峰出现；接着进一针水，一针流动相，均在21min出峰；怀疑是否是进样针污染； 4. 换了一个进样针，21min出峰 注：1. 样品缓冲液的出峰时间在～20min； 2. 21min峰的峰面积忽大忽小。 有哪位虫子可以帮我解决一下这个问题，不甚感激。 |
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