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xlf_407

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】SEC-HPLC中遇到的问题

各位虫子们,我最近在做方法验证--SEC-HPLC检测蛋白样品中高分子杂质,柱子是TSK SWxl3000,流速0.6min/ml,样品出峰时间在~15min,HPLC是手动进样。
1. 在耐用性研究中,检测样品在室温的稳定性,将样品放在室温24h,对样品进行检测,发现在21min出现一降解峰。
2. 之后开始检测限实验,就发现每一针都在21min出现一个峰,怀疑是柱子吸附蛋白,冲洗柱子后,依然在21min出峰;怀疑进样阀不干净;
3. 冲洗进样阀后,直接将进样阀有Load转到Inject,什么样品都不进,结果基线平稳,无峰出现;接着进一针水,一针流动相,均在21min出峰;怀疑是否是进样针污染;
4. 换了一个进样针,21min出峰

注:1. 样品缓冲液的出峰时间在~20min;
       2. 21min峰的峰面积忽大忽小。

有哪位虫子可以帮我解决一下这个问题,不甚感激。
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zhaojunji06

铜虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
opq691(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流,欢迎常来分析版 9-16 14:24
可能是溶剂的问题,你可以上个溶剂看看是否在21min也有峰出现。
2楼2009-09-15 17:15:49
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kingwin625

木虫 (正式写手)

可能是正常现象,期待高手对原理解释一下吧。
3楼2009-09-15 17:23:24
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