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反对派

银虫 (正式写手)

[求助] 请教CRISPRO 敲除基因,结果反而升高。

最近用一个可以表达两个gRNA的载体,构建了一个敲除一段基因的质粒,转染后后用抗生素筛选了20个克隆,用RT-qPCR鉴定敲除效果,结果发现这些克隆不但没有敲掉,反而表达量显著升高。计算没有敲掉也不至于升高,请问问题出在哪里?

备注:抽提RNA后,我用DNas I去除了DNA污染. qPCR的引物也没有问题。
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反对派

银虫 (正式写手)

送红花一朵
您好,谢谢您的回答。如何确定细胞内有几个同源的序列。我想把这些同源序列全部敲除
3楼2022-10-02 04:02:56
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fengxueren

新虫 (正式写手)

2楼2022-09-27 12:39:16
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走了002

新虫 (著名写手)

crispr是切除了转录起始位点?

发自小木虫Android客户端
4楼2023-10-22 13:30:06
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