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反对派银虫 (正式写手)
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请教CRISPRO 敲除基因，结果反而升高。
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最近用一个可以表达两个gRNA的载体，构建了一个敲除一段基因的质粒，转染后后用抗生素筛选了20个克隆，用RT-qPCR鉴定敲除效果，结果发现这些克隆不但没有敲掉，反而表达量显著升高。计算没有敲掉也不至于升高，请问问题出在哪里? 备注：抽提RNA后，我用DNas I去除了DNA污染. qPCR的引物也没有问题。 |
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