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反对派银虫 (正式写手)
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逆转录结束后，为何要灭活逆转录酶？
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invitrogen公司的M-MLV Reverse Transcriptase进行逆转录疑问： 1. 程序上的问题。37℃ 2min→25℃ 10min→37℃ 50min。 中间这个25℃是起什么作用？ 2. 反应结束后为何要70 ℃，15分钟将逆转录酶灭活。 3.逆转录这一步的的成分里面哪些东西会影响后续的 qPCR? |
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反对派
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送红花一朵 5楼2023-01-07 11:43:47
Endotoxin
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一般逆转录时用的随机引物才会25度。逆转录酶特别是mmlv还有末端转移酶活性，可能会在合成的cDNA末端添加碱基c详细可以参考smart。逆转录产物中的离子，残留引物都可能影响后续扩增，所以一般下一步做PCR的话，逆转录产物最好不要超过PCR反应体系十分之一。 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2022-10-01 23:21:06
Endotoxin
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关于要灭活逆转录酶活性还有一个重要原因可能是RT竞争性抑制DNA pol，推测是影响DNA pol结合到cDNA模板。 发自小木虫IOS客户端 |
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3楼2022-10-02 08:42:27
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4楼2022-10-02 12:18:41
