| 查看: 1445 | 回复: 4 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者反对派将赠送您 30 个金币 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
反对派银虫 (正式写手)
|
[求助]
逆转录结束后，为何要灭活逆转录酶？
|
|
|
invitrogen公司的M-MLV Reverse Transcriptase进行逆转录疑问： 1. 程序上的问题。37℃ 2min→25℃ 10min→37℃ 50min。 中间这个25℃是起什么作用？ 2. 反应结束后为何要70 ℃，15分钟将逆转录酶灭活。 3.逆转录这一步的的成分里面哪些东西会影响后续的 qPCR? |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有76人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
Endotoxin
金虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1275.2
- 散金: 859
- 红花: 4
- 沙发: 2
- 帖子: 1210
- 在线: 115.2小时
- 虫号: 14666428
- 注册: 2019-03-20
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
|
关于要灭活逆转录酶活性还有一个重要原因可能是RT竞争性抑制DNA pol，推测是影响DNA pol结合到cDNA模板。 发自小木虫IOS客户端 |
反对派3楼2022-10-02 08:42:27
Endotoxin
金虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1275.2
- 散金: 859
- 红花: 4
- 沙发: 2
- 帖子: 1210
- 在线: 115.2小时
- 虫号: 14666428
- 注册: 2019-03-20
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
|
一般逆转录时用的随机引物才会25度。逆转录酶特别是mmlv还有末端转移酶活性，可能会在合成的cDNA末端添加碱基c详细可以参考smart。逆转录产物中的离子，残留引物都可能影响后续扩增，所以一般下一步做PCR的话，逆转录产物最好不要超过PCR反应体系十分之一。 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2022-10-01 23:21:06
反对派
银虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2228.1
- 散金: 50
- 红花: 5
- 帖子: 495
- 在线: 216.6小时
- 虫号: 1889311
- 注册: 2012-07-12
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2022-10-02 12:18:41
反对派
银虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2228.1
- 散金: 50
- 红花: 5
- 帖子: 495
- 在线: 216.6小时
- 虫号: 1889311
- 注册: 2012-07-12
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2023-01-07 11:43:47
10