| 查看: 1654 | 回复: 4 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者反对派将赠送您 30 个金币 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
反对派银虫 (正式写手)
|
[求助]
逆转录结束后，为何要灭活逆转录酶？
|
|
|
invitrogen公司的M-MLV Reverse Transcriptase进行逆转录疑问： 1. 程序上的问题。37℃ 2min→25℃ 10min→37℃ 50min。 中间这个25℃是起什么作用？ 2. 反应结束后为何要70 ℃，15分钟将逆转录酶灭活。 3.逆转录这一步的的成分里面哪些东西会影响后续的 qPCR? |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有66人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
Endotoxin
金虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1275.2
- 散金: 859
- 红花: 4
- 沙发: 2
- 帖子: 1210
- 在线: 115.2小时
- 虫号: 14666428
- 注册: 2019-03-20
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
|
关于要灭活逆转录酶活性还有一个重要原因可能是RT竞争性抑制DNA pol，推测是影响DNA pol结合到cDNA模板。 发自小木虫IOS客户端 |
反对派3楼2022-10-02 08:42:27
Endotoxin
金虫 (著名写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1275.2
- 散金: 859
- 红花: 4
- 沙发: 2
- 帖子: 1210
- 在线: 115.2小时
- 虫号: 14666428
- 注册: 2019-03-20
- 性别: GG
- 专业: 人类遗传学
|
一般逆转录时用的随机引物才会25度。逆转录酶特别是mmlv还有末端转移酶活性，可能会在合成的cDNA末端添加碱基c详细可以参考smart。逆转录产物中的离子，残留引物都可能影响后续扩增，所以一般下一步做PCR的话，逆转录产物最好不要超过PCR反应体系十分之一。 发自小木虫IOS客户端 |
2楼2022-10-01 23:21:06
反对派
银虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2228.1
- 散金: 50
- 红花: 5
- 帖子: 495
- 在线: 216.6小时
- 虫号: 1889311
- 注册: 2012-07-12
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2022-10-02 12:18:41
反对派
银虫 (正式写手)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 2228.1
- 散金: 50
- 红花: 5
- 帖子: 495
- 在线: 216.6小时
- 虫号: 1889311
- 注册: 2012-07-12
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
5楼2023-01-07 11:43:47
