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荧光抗体上机检测却发现所有细胞都会被染色
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大家好，我是流式荧光崔工，一个旨在链接与流式荧光相关的朋友，一起赚钱、一起学习、一起工作、一起生活的靓仔。 — 1 — 前面的文章前人拿血的教训总结出来的经验，我们要多学习学习，讲了唐山打人事件总结出来的道理，那就是打得赢就打，打不赢就跑，希望大家在遇到危险的时候审时度势，关键时刻能保命。 上个星期在上海待了几天，拜访了一些终端客户，见了一些潜在合作经销商，聊了一些粉丝好友。 从早上7点出门，回到酒店基本上都是8点以后，中饭基本上顾不上吃，倒也省事，等到晚上一起解决。 一位朋友介绍了一个交大的合作项目，后期有机会跟大家分享分享。 — 2 — 崔工，我标的FITC不太成功 好像和其他细胞、杂质全都结合了 能帮我看看是什么原因吗？ M老师在快要下班的时候给崔工发来信息 能看得出M老师很着急，趁着还没有下班感觉向崔工寻求帮助。 不过M老师不用急，正常情况下崔工的手机基本上都在身边的，只要崔工看到消息了都会回，不会因为下班了就不回老师们的信息。 M老师可以太着急了，没有把问题说清楚，崔工没法帮忙分析具体的原因，就一步一步询问具体的细节。 您标记的不是抗体？ 是的，标记的是抗体，CD3抗体。 那崔工能猜出是怎么样一个情况，M老师可能是用FITC标记CD3抗体，再把标记好的荧光抗体加入样本中上机检测。 结果发现不单单是表达CD3抗体的细胞被染色了，而是所有的细胞都被染色了。 崔工把猜测跟M老师确认。 M老师说，对的，就是这样，崔工你看图是这样的。  如果是这个问题，那崔工心里有底了，不是大问题。 为什么这么说？ 因为在前段时间苏州的L老师也遇到过同样的问题，崔工跟L老师交流后，问题就解决了。 但崔工不能直接把上次解决方案告诉M老师，怎么怎么做。 崔工还是按部就班的帮M老师梳理每个环节。 崔工问：你标记好抗体后有没有去除多余的抗体或者FITC。 有的，用的是您家的蛋白离心式快速脱盐柱。 M老师并不知道崔工心里已经知道是什么原因了，她还是很焦急的问道。 有哪些原因会导致实验失败呢，按道理FITC标记抗体是荧光染料标记抗体里最简单的。 是的，FITC是荧光染料标记抗体里最简单的，简单但并不能代表一定就能马上做成功。 崔工继续回答道，能跟杂质、所有细胞都结合了，那说明肯定是有游离的FITC。 了解FITC标记抗体原理的都知道，FITC是很容易就和蛋白结合的。 如果抗体跟FITC交联后，没有把未交联的FITC，也就是大家说的游离的FITC去除掉，游离的FITC是极易与蛋白结合。 这就很有可能出现前面M老师反应的那样，其他细胞、杂质全都被染上了颜色。 既然已经知道问题所在了，那我们就想办法把游离的FITC去除。 在以前的文章样本的脱盐方法有哪些？中，崔工介绍了3种方法，分别是超滤管、离心式快速脱盐柱和透析袋。 在文章中，崔工分析了各种方法的优缺点，总结出，最快、最便捷的是用离心式快速脱盐柱。 崔工告诉M老师选择一种方式把游离的FITC去除掉就可以了。 过几天崔工询问M老师，实验进行的怎么样，问题是否解决。 M老师很感激崔工，他的问题已经解决了，说有机会请崔工吃饭。 M老师其实不必客气，M老师是通过崔工这个账号链接上的合作。 崔工写这个账号的目的在每篇文章的开头就写清楚了，那就是链接与流式荧光相关的朋友，一起赚钱、一起学习、一起工作、一起生活。 今天的文章就分享到这，如果今天的文章对您有一点点帮忙或一丝丝的启发，欢迎帮忙点个在看和转发。 你也可以微信搜索mrcui128加崔工微信号或者搜索流式荧光崔工加崔工公众号交流 |
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