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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白断裂或者降解会影响蛋白的浓度么？
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我要睡觉

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白断裂或者降解会影响蛋白的浓度么？ 已有2人参与

如题，各位大神，蛋白浓缩完成后用Bradford进行定量。根据定量结果取2ug跑胶，但是跑胶出来的条带大概有三四条，都在目标分子量处，且条带都很细，跟2ug的BSA条带对比，感觉目标泳道的条带细且浅，但是是多条的。
但，之前的纯化图的泳道中只有一条较粗的目的条带。

以上是背景，现在怀疑是不是定量偏高，导致定量后跑的条带情况要弱？
第二点，定量后跑胶条带出现了多条，怀疑蛋白是不是断裂或者降解了，若是的话，断裂或者降解后的蛋白浓度会发生变化么？（这个问题是我比较想知道的）
跪求各位大神的指点
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1楼 2022-09-21 10:09:46
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盗我QQ者必下地�

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2025-08-20 11:48:02
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我要睡觉: 金币+10, ★★★很有帮助 2022-09-21 15:48:11
这个问题要分两个方面来说，一个是蛋白降解会不会影响蛋白的实际浓度；另一个是蛋白降解会不会影响浓度的测量。
蛋白降解或者断裂了当然会影响目的蛋白的浓度。如果你说的蛋白指的是总蛋白浓度的话，末端一些片段的被切割不会影响摩尔浓度，但会影响质量浓度(mg/ml)。
至于一个蛋白变成两段或多段以后和断裂前，测量的表观浓度有没有差别，这取决于测量方法。如果断裂不是很严重，测量的总蛋白表观浓度不会有明显差别。如果严重断裂，一般来说用BCA和Bradford法测得的总蛋白表观浓度会小一些，用UV280测得的表观浓度不变。
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我要睡觉
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2022-09-21 14:50:09
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我要睡觉

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2022-09-21 14:50:09
这个问题要分两个方面来说，一个是蛋白降解会不会影响蛋白的实际浓度；另一个是蛋白降解会不会影响浓度的测量。
蛋白降解或者断裂了当然会影响目的蛋白的浓度。如果你说的蛋白指的是总蛋白浓度的话，末端一些片段的 ...

感觉大神的回复，有学习到。
还有个问题也想请教下：Bradford定量完成后，根据浓度会取2ug的蛋白来跑SDS-PAGE，同时会有2ug的BSA作为对照。但是有时候会有一些蛋白的跑出口的条带粗细大小跟BSA相差甚远(基本只有目的蛋白条带，不存在其他杂蛋白)，开始会怀疑是定量偏高导致的，重新定量后再跑条带情况也是差不多的，这种现象真的有点想不通哇。
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3楼2022-09-21 15:37:16
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