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我要睡觉

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白断裂或者降解会影响蛋白的浓度么? 已有2人参与

如题,各位大神,蛋白浓缩完成后用Bradford进行定量。根据定量结果取2ug跑胶,但是跑胶出来的条带大概有三四条,都在目标分子量处,且条带都很细,跟2ug的BSA条带对比,感觉目标泳道的条带细且浅,但是是多条的。
但,之前的纯化图的泳道中只有一条较粗的目的条带。

以上是背景,现在怀疑是不是定量偏高,导致定量后跑的条带情况要弱?
第二点,定量后跑胶条带出现了多条,怀疑蛋白是不是断裂或者降解了,若是的话,断裂或者降解后的蛋白浓度会发生变化么?(这个问题是我比较想知道的)
跪求各位大神的指点
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
我要睡觉: 金币+10, ★★★很有帮助 2022-09-21 15:48:11
这个问题要分两个方面来说,一个是蛋白降解会不会影响蛋白的实际浓度;另一个是蛋白降解会不会影响浓度的测量。
蛋白降解或者断裂了当然会影响目的蛋白的浓度。如果你说的蛋白指的是总蛋白浓度的话,末端一些片段的被切割不会影响摩尔浓度,但会影响质量浓度(mg/ml)。
至于一个蛋白变成两段或多段以后和断裂前,测量的表观浓度有没有差别,这取决于测量方法。如果断裂不是很严重,测量的总蛋白表观浓度不会有明显差别。如果严重断裂,一般来说用BCA和Bradford法测得的总蛋白表观浓度会小一些,用UV280测得的表观浓度不变。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2022-09-21 14:50:09
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我要睡觉

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2022-09-21 14:50:09
这个问题要分两个方面来说,一个是蛋白降解会不会影响蛋白的实际浓度;另一个是蛋白降解会不会影响浓度的测量。
蛋白降解或者断裂了当然会影响目的蛋白的浓度。如果你说的蛋白指的是总蛋白浓度的话,末端一些片段的 ...

感觉大神的回复,有学习到。
还有个问题也想请教下:Bradford定量完成后,根据浓度会取2ug的蛋白来跑SDS-PAGE,同时会有2ug的BSA作为对照。但是有时候会有一些蛋白的跑出口的条带粗细大小跟BSA相差甚远(基本只有目的蛋白条带,不存在其他杂蛋白),开始会怀疑是定量偏高导致的,重新定量后再跑条带情况也是差不多的,这种现象真的有点想不通哇。
3楼2022-09-21 15:37:16
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本帖内容被屏蔽

4楼2025-08-20 11:48:02
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