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xihanlianz银虫 (正式写手)
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[交流]
为什么ISSR引物PCR扩增后条带少
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请教大家，以下是我用ISSR引物扩增DNA的实验。实验目的是用温度梯度筛选最佳退火温度。生工给的Tm是53.18.图中第五条是Marker，除此之外，从1到10泳道的温度分别为45.5，46.3，47.7，49.4，51.4，53.3，55.3，57.6，59.2. 我用的反应体系是2ulDNA， 1.5mM MgCl2，0.2mMdNTPs，0.15uM primer，1U Taq。循环参数:94度，7分，（94度 30秒，45度开始的温度梯度，45秒， 72度 3分）35个循环。最后72度，7分钟 跑出条带的退火温度比Tm值高，但是又只有三条条带，条带数太少了。看文献中普遍能有十几条，少点可能6，7条。请大家帮忙分析下原因，请高手指教该如何去优化实验方案？ [ Last edited by amisking on 2009-9-13 at 18:30 ] |
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