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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » SDS-PAGE电泳法，marker缺最大的两条带可能的原因？
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moyunzhi

铜虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE电泳法，marker缺最大的两条带可能的原因？ 已有1人参与

最近遇到很神奇的一个问题：
我在跑SDS-PAGE电泳时，marker一共8条带，但时跑出来时只有6条带，最大的两条带没有。
于是我购买了 制胶的kit，用kit制胶跑出来的也是6条带。 然后我就把同一管marker送到别的实验室帮忙也跑了一下，奇迹似乎出现了，别的实验室就能把
marker的完整条带都跑出来。
现在是在时懵的不行。难道时我人出了问题？
求各位有经验的大佬指点一下。感激！感激！感激！
（小木虫上传图片怎么回事？上传不了？一上传就卡死了。给不了图片啊，伤心，伤心。）
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1楼 2022-09-05 09:15:57
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moyunzhi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小鸟游佑太 at 2022-09-07 11:05:44
根据你的描述，如果你不是后来把内外槽的buffer液面补充到相同高度，我做一个猜想，浓缩胶漏液，而分离胶不漏液，这个说明，漏液问题应该不是胶板装夹问题导致的，应该是从胶板内漏出去的，可能是浓缩胶一开始和玻 ...

谢谢您的帮助，我后来把胶提前放水里泡了一会儿，还是有点漏，反正就是反复弄，终于没有怎么漏了，胶的浓度我也降到了10%，今天跑了一下，marker的第二条大带也看见了，但是最大的那条没有看见，考染明天看结果如何。
非常感谢！
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5楼2022-09-08 21:34:52
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小鸟游佑太

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
根据你的描述，marker本身是没有问题的，问题应该就出现在凝胶或者电泳上面。
至于在何种情况下，大分子量蛋白无法被分离出，我个人认为有两点：
1、电泳未结束，溴酚蓝带需要跑到凝胶底部
2、凝胶浓度选择不合适，应在你用的凝胶浓度基础上，浓度要低一些
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2楼2022-09-06 09:26:31
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moyunzhi

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小鸟游佑太 at 2022-09-06 09:26:31
根据你的描述，marker本身是没有问题的，问题应该就出现在凝胶或者电泳上面。
至于在何种情况下，大分子量蛋白无法被分离出，我个人认为有两点：
1、电泳未结束，溴酚蓝带需要跑到凝胶底部
2、凝胶浓度选择不合适 ...

感谢您的帮助，我可能还需要补充一下我跑胶时遇到的问题：1.我请别的实验室帮忙跑胶时是都是用的12%的分离胶，4%的浓缩胶；2.我跑浓缩胶时，电泳内槽buffer漏到外槽，我就补了buffer,但奇怪的是跑分离胶时，就不漏了。内槽液面液稳定。
不知道是不是这个“漏液”导致的结果？但是为啥跑到分离胶时又不漏液了呢？就很奇怪。百思不得其解。
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3楼2022-09-07 08:52:02
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小鸟游佑太

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by moyunzhi at 2022-09-07 08:52:02
感谢您的帮助，我可能还需要补充一下我跑胶时遇到的问题：1.我请别的实验室帮忙跑胶时是都是用的12%的分离胶，4%的浓缩胶；2.我跑浓缩胶时，电泳内槽buffer漏到外槽，我就补了buffer,但奇怪的是跑分离胶时，就不漏 ...

根据你的描述，如果你不是后来把内外槽的buffer液面补充到相同高度，我做一个猜想，浓缩胶漏液，而分离胶不漏液，这个说明，漏液问题应该不是胶板装夹问题导致的，应该是从胶板内漏出去的，可能是浓缩胶一开始和玻板之间有缝隙，在之后，凝胶不断吸水膨胀，使得凝胶与板子贴合更紧密，因此，后面就不漏液了，从这个猜想去分析大分子蛋白消失的问题，可能是大蛋白在后面因为凝胶和胶板的缝隙跑丢了。
       解决方法：为了解决玻璃板和凝胶的缝隙问题，需要注意几点，1、凝胶配置好需要立即使用，防止凝胶干缩；2、玻璃板需要清洗干净，不能有任何污渍；3、凝胶的速凝剂比例要选择合适
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4楼2022-09-07 11:05:44
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