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小蛀虫张

铁虫 (初入文坛)


[交流] 金黄色葡萄球菌胞内碱性磷酸酶(AKP)的测定

大家好:
最近一直在测金葡中碱性磷酸酶的活性,具体试验是:将细胞悬液于1.5 mL塑料管中,在冰水浴,300W的超声强度下超声3s,间隔10s,共30次。之后按照磷酸苯二钠法测定,酶活。结果却在510 nm处一直没有吸光度。不知道问题出在哪里。反应体系的PH值为10,属于AKP酶的最适PH。
有大神可以指导一下吗?
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周西西a

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也在做测定金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的碱性磷酸酶,我是用我自己合成的化合物来作用这两种菌,我之前测定过上清液,和考马斯亮蓝反应之后测定蛋白浓度是有变化的,然后我就想同理的是他能破坏细胞,然后里面的碱性磷酸酶就出来了,我用的是pnpp(4-硝基苯磷酸二钠)为底物,用的碳酸钠-碳酸氢钠为底液,查的文献和一些试剂盒上显示的是在405-420之间有吸光度,一开始测了pnpp的全波长,然后又测定了和pnpp反应之后的全波长,在405-420nm也没有吸收峰,我想我们可以简单讨论一下。
9楼2023-03-19 11:38:35
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liu5610372

银虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
正常情况这样方法是检测到的含量很低,因为这个酶只有在细胞壁遭到破坏时才可以检测到
7楼2022-09-05 12:54:33
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小蛀虫张

铁虫 (初入文坛)


引用回帖:
7楼: Originally posted by liu5610372 at 2022-09-05 12:54:33
正常情况这样方法是检测到的含量很低,因为这个酶只有在细胞壁遭到破坏时才可以检测到

我试验的时候用超声细胞破碎仪破碎过,但是依旧检测不出来,就像您说的,可能含量很低,检测不到。
8楼2022-09-05 15:08:00
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XG-WUST2楼
2022-08-26 20:28   回复  
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