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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 微生物、发酵 » 金黄色葡萄球菌胞内碱性磷酸酶（AKP）的测定
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小蛀虫张

铁虫 (初入文坛)

[交流] 金黄色葡萄球菌胞内碱性磷酸酶（AKP）的测定

大家好：
最近一直在测金葡中碱性磷酸酶的活性，具体试验是：将细胞悬液于1.5 mL塑料管中，在冰水浴，300W的超声强度下超声3s，间隔10s，共30次。之后按照磷酸苯二钠法测定，酶活。结果却在510 nm处一直没有吸光度。不知道问题出在哪里。反应体系的PH值为10，属于AKP酶的最适PH。
有大神可以指导一下吗？
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1楼 2022-08-26 15:29:50
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小蛀虫张

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by liu5610372 at 2022-09-05 12:54:33
正常情况这样方法是检测到的含量很低，因为这个酶只有在细胞壁遭到破坏时才可以检测到

我试验的时候用超声细胞破碎仪破碎过，但是依旧检测不出来，就像您说的，可能含量很低，检测不到。
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8楼2022-09-05 15:08:00
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liu5610372

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
正常情况这样方法是检测到的含量很低，因为这个酶只有在细胞壁遭到破坏时才可以检测到
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7楼2022-09-05 12:54:33
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周西西a

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也在做测定金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的碱性磷酸酶，我是用我自己合成的化合物来作用这两种菌，我之前测定过上清液，和考马斯亮蓝反应之后测定蛋白浓度是有变化的，然后我就想同理的是他能破坏细胞，然后里面的碱性磷酸酶就出来了，我用的是pnpp（4-硝基苯磷酸二钠）为底物，用的碳酸钠-碳酸氢钠为底液，查的文献和一些试剂盒上显示的是在405-420之间有吸光度，一开始测了pnpp的全波长，然后又测定了和pnpp反应之后的全波长，在405-420nm也没有吸收峰，我想我们可以简单讨论一下。
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9楼2023-03-19 11:38:35
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XG-WUST2楼
2022-08-26 20:28   回复  
小蛀虫张(金币+1): 谢谢参与
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