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青椒之路

铜虫 (正式写手)

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[交流] 利用无缝克隆构建重组转化子，效率真高，转化子筛选8个全对

利用无缝克隆构建重组转化子，效率真高，转化子筛选8个全对

无缝克隆技术是一种新的、快速、简洁的克隆方法，可以在质粒的任何位点进行一个或多个目标 DNA 的片断的插入，而不需要任何限制性内切酶和连接酶。突破传统的双酶切再加上连接，只需要一步重组法，即可得到高效率克隆的重组载体，大大提高了工作效率传统克隆

• PCR 引物设计需引入载体上的酶切位点，PCR 产物再经过酶切、胶回收、连接后定向克隆到目的载体上；
• 需要查找合适的酶切位点，购买各种内切酶；
• 阳性率低；
• 多个片段，通常只能分多次拼接。
无缝克隆
• 只需要一次反应即可完成定向克隆，省略酶切、酶连等过程；
• 对酶切位点无要求，可以把目的片段插入到任意载体的任意位点；
• 连接片段之间不会引入任何其他序列；
• 可以同时克隆多个片段。
无缝克隆的优势

相较于传统克隆的方式，有几点显而易见的优势：

1. 可以不需要任何限制性内切酶、连接酶，也不需要磷酸化、末端补平等操作；
2. 可同时连接多个 DNA 片段，最多可达 10 个；
3. 不附加任何多余序列，精确定向连接；
4. 体系反应时间仅需 15-30 min，快速反应。

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