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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » p了N多次测序结果要么是无结果，要么只能找到上游或下游引物，要么都找到，但非要片段
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fyn512045

新虫 (初入文坛)

[交流] p了N多次测序结果要么是无结果，要么只能找到上游或下游引物，要么都找到，但非要片段

请教各位了，我做了好长时间片段扩增了，每次的测序结果要么是无结果，要么只能找到上游或下游引物，要么都找到，但不是我要的片段，都做了好几个月了，一个很保守的区域，人家好几篇文章上能做出来，我一做也是前面那样，引物换了再换，我现在都不知道怎么办了？结题的时间快到了，我都快疯了！
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1楼 2009-09-12 11:31:05
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xmchen1015

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先，确定一个你设计的引物有没有问题，如果引物没有问题，可以参考一下：
从基因组上P片段不会很容易，尤其是片断大于1kb,你可以把退火温度降到50度或者最低到45度试试，一定要确定P出的产物是你想要的目的大小的片段再拿去测序。
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5楼2009-09-12 15:18:33
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
生命核心(金币+1,VIP+0):支持重新设计引物 9-12 23:25
P了N次都没有得到你想要的片段，说明你的引物设计有问题，很保守的区域一般都是很好扩的，我在我做的这个物种没有EST，只能靠兼并引物（CODEHOP在线设计），也摸了好长的时间，最后几个要的基因都拿到了片段，全长指日可待
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2楼2009-09-12 12:01:17
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anik

银虫 (正式写手)
退火温度呢？做个TOUCHDOWN-PCR
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3楼2009-09-12 14:15:31
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菊花茶

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看一下是不是载体片段，如果是那目的片段就没连上
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4楼2009-09-12 14:41:22
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