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汕头大学海洋科学接受调剂
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fyn512045

新虫 (初入文坛)

[交流] p了N多次测序结果要么是无结果,要么只能找到上游或下游引物,要么都找到,但非要片段

请教各位了,我做了好长时间片段扩增了,每次的测序结果要么是无结果,要么只能找到上游或下游引物,要么都找到,但不是我要的片段,都做了好几个月了,一个很保守的区域,人家好几篇文章上能做出来,我一做也是前面那样,引物换了再换,我现在都不知道怎么办了?结题的时间快到了,我都快疯了!
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菊花茶

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议你把你扩增片段的引物和菌液一块儿送去,测序用你的引物,不用载体引物。这样的好处要么测不出来,如果测出来那可定是你的片段。如果测不出,很可能是菌液质量不好,质粒产量过少。
10楼2009-09-14 12:27:08
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
生命核心(金币+1,VIP+0):支持重新设计引物 9-12 23:25
P了N次都没有得到你想要的片段,说明你的引物设计有问题,很保守的区域一般都是很好扩的,我在我做的这个物种没有EST,只能靠兼并引物(CODEHOP在线设计),也摸了好长的时间,最后几个要的基因都拿到了片段,全长指日可待
2楼2009-09-12 12:01:17
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anik

银虫 (正式写手)

退火温度呢?做个TOUCHDOWN-PCR
3楼2009-09-12 14:15:31
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菊花茶

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看一下是不是载体片段,如果是那目的片段就没连上
4楼2009-09-12 14:41:22
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