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[交流]
关于HRV 3C Protease切蛋白的问题,救救孩子吧
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| 大佬们,小弟最近在做蛋白纯化,目的序列是777bp,使用的是pcold tf dna载体,为了获得干净的目的蛋白去制备多抗,需要用takara的HRV 3C Protease去切tf伴侣分子和标签,但是怎么都分离不开(具体表现为目的蛋白和HRV 3C Protease还有TF伴侣分子加标签同时要么不出现,要么同时出现在sds-page胶中,即无法使目的蛋白与52kda的TF伴侣分子加标签分离),貌似无标签的目的蛋白出现了挂镍柱现象,人都傻了。现在不知道要怎么办了,有没有大佬有过成功的案例,具体的操作方法是什么,我想复刻一下,看看到底是哪里出的问题。 |
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