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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于HRV 3C Protease切蛋白的问题，救救孩子吧
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CS1732

新虫 (初入文坛)

[交流] 关于HRV 3C Protease切蛋白的问题，救救孩子吧

大佬们，小弟最近在做蛋白纯化，目的序列是777bp，使用的是pcold tf dna载体，为了获得干净的目的蛋白去制备多抗，需要用takara的HRV 3C Protease去切tf伴侣分子和标签，但是怎么都分离不开（具体表现为目的蛋白和HRV 3C Protease还有TF伴侣分子加标签同时要么不出现，要么同时出现在sds-page胶中，即无法使目的蛋白与52kda的TF伴侣分子加标签分离）,貌似无标签的目的蛋白出现了挂镍柱现象，人都傻了。现在不知道要怎么办了，有没有大佬有过成功的案例，具体的操作方法是什么，我想复刻一下，看看到底是哪里出的问题。
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1楼2022-08-11 09:20:28
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
★
CS1732(金币+1): 谢谢参与
在酶切位点与目的基因之间加入柔性link (如GGSSG类似序列)？
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5楼2022-08-12 10:38:00
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tzynew2楼
2022-08-11 09:27   回复  
CS1732(金币+1): 谢谢参与
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miaojiabing3楼
2022-08-11 12:42   回复  
CS1732(金币+1): 谢谢参与
假大空4楼
2022-08-11 15:55   回复  
CS1732(金币+1): 谢谢参与
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