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CS1732

新虫 (初入文坛)

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金币: 11
帖子: 3
在线: 39分钟
虫号: 29821781

[交流] 关于HRV 3C Protease切蛋白的问题，救救孩子吧

大佬们，小弟最近在做蛋白纯化，目的序列是777bp，使用的是pcold tf dna载体，为了获得干净的目的蛋白去制备多抗，需要用takara的HRV 3C Protease去切tf伴侣分子和标签，但是怎么都分离不开（具体表现为目的蛋白和HRV 3C Protease还有TF伴侣分子加标签同时要么不出现，要么同时出现在sds-page胶中，即无法使目的蛋白与52kda的TF伴侣分子加标签分离）,貌似无标签的目的蛋白出现了挂镍柱现象，人都傻了。现在不知道要怎么办了，有没有大佬有过成功的案例，具体的操作方法是什么，我想复刻一下，看看到底是哪里出的问题。

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