| 查看: 1116 | 回复: 3 | ||
| 【悬赏金币】回答本帖问题，作者ZZZZ0929将赠送您 5 个金币 | ||
[求助]
求助，毕赤酵母表达蛋白
|
||
|
求助大家，想要两个基因到入毕赤酵母进行表达，实验室没有基础，想求助以下问题 1.质粒线性化内切酶的选择： 按照文献上选择，质粒1内切酶在5 AOX1位点酶切，质粒2在5 AOX1+目的基因酶切。是否改变第二个质粒的酶切位点即可（在5 AOX1处、不在目的基因处）。 是否需要考虑，两个基因整合到毕赤酵母基因组不同位点？ 2.毕赤酵母化学转化法是否可行？需要质粒多少ug合适？ 电穿孔仪货期要3-4月，且贵。查到之前用Licl/PEG3350，可以嘛。质粒1大概有4 ug，质粒2 15.6 ug 培养到OD多少合适，看到有0.8-1 有1-1.2 1.3-1.5 3.毕赤酵母PCR阳性克隆筛选： 引物是否找载体的通用测序引物就行？查到毕赤酵母破壁后可以直接进行PCR，不用提取基因组DNA，这个信息对吗； 4.载体抗性和筛选： 质粒1是博来霉素抗性，质粒2是Kana/Amp抗性，如果两个均整合成功，是不是之后用Kana就行，还是要再加上博来霉素真菌抗生素呢 打算一个用组氨酸缺陷培养基筛选；一个用博来霉素筛选。查到可以依靠博来霉素浓度递增来筛选拷贝数多的菌株，那第一个要怎么筛选呢 4.SG-His培养基是直接买现成的比较好嘛？还是买YNB自己配？ 组内人都已经问过，所以上网求助，谢谢大家 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有79人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
2楼2022-08-10 20:32:01
3楼2022-08-11 13:41:11
4楼2022-08-11 13:57:23
