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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母好难
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乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)

[交流] 毕赤酵母好难 已有5人参与

对于会者来说不难，但是我没有成功表达过毕赤酵母可太难了。
转化后第五天才在md上出现转化子，形态特征和酵母一样。欣喜的去用遗传霉素筛选，也得到了菌落随着梯度减少的结果。PCR怎么都p不出来，没有2200这条酵母自身的带，但是有一条1900的带（算上AOX基因加上我的目的基因正好）；就顺着往下一步用目的基因引物验证了，又P不出来，唉。。:-(

毕赤酵母好难


毕赤酵母好难-1


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我思故我在
1楼 2022-08-08 22:55:44
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木杉1123

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转化成功后这个菌就可以利用组氨酸了呀…

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乌克兰跑男
3楼2022-08-09 14:31:13
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乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
我用的GS115  PPIC9K载体 sal.1单酶切 前边都没问题，转化后甚至连感受态涂md板都会有菌落，不是组氨酸缺陷的么，怎么会长呢？感觉和invitrogen的手册不是一个路数，来个大佬带带弟弟吧

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我思故我在
2楼2022-08-08 22:58:26
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乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 木杉1123 at 2022-08-09 14:31:13
转化成功后这个菌就可以利用组氨酸了呀…

没转化的感受态涂布也长了，MD都按着配方配的 这个解释不了，长出来的菌p后是假阳性。 能和您交流下转化流程吗，我的转化总是不成功。

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我思故我在
4楼2022-08-09 16:08:32
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匿名

本帖仅楼主可见
5楼2022-08-10 20:33:11
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