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每日科研进展 l 2022.08.08 l 新型可持续规模化生产双链 RNA 生物农药的平台
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新型可持续规模化生产双链 RNA 生物农药的平台 RNA 干扰 (RNAi) 是真核细胞进化出的用于调节基因表达的最保守的途径之一。RNAi 利用不可翻译的双链 RNA (dsRNA) 分子来隔离或降解 mRNA 分子基因。在 RNAi 中，专门设计的外源性 dsRNA 传递到细胞可以使靶基因沉默，这种现象在基因功能研究中得到大量的应用，并在生物农药应用中进行了探索。无机农药对生物多样性影响极大的促进了寻找安全和可持续的作物害虫管理方案。得益于RNAi的高目标特异性和低环境影响，dsRNA 喷雾剂替代无机农药的前景越来越受欢迎。然而，要使 dsRNA 进入农药市场，它必须以具有成本效益和可持续的方式生产。图片 图 1. IPTG 诱导时间和dsRNA产量 在本文中，研究人员开发了一种高产表达培养基，使用 1mM IPTG 诱导后，与现有的表达培养基相比，该培养基产生高达 15 倍的 dsRNA 产量（图 1）。 图片 图 2. dsRNA生产纯度的比较分析 该研究优化了一种产生高质量和纯化 dsRNA 的低成本纯化方法。开发的方法无需使用商业试剂盒或商业核酸酶中常见的危险化学试剂来消除污染 DNA 或单链 RNA (ssRNA) （图 2）。 图片 图 3. 使用DPM2纯化方法后的dsRNA检测 该研究还证明了生产平台是可扩展的，从 259 mg 湿大肠杆菌细胞颗粒中生成 6.29 mg dsRNA。该结果还提供了对微生物来源的 dsRNA 库中异质 dsRNA 种类分析（图 3）。图片 图 4. 纯化后的dsRNA对烟粉虱的毒性 最后，该研究还表明，未经事先配制的纯化“裸”dsRNA 可以在田间条件下诱导昆虫毒性（图 4）。本研究提供了一种新颖、完整、低成本的工艺dsRNA平台，具有在工业dsRNA生产中的应用潜力。 原文链接： https://doi.org/10.21203/rs.3.rs-1880782/v1 关注我们：微信公众号 “RNAi技术前沿” |
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