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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 菌种资源 » pMG36e质粒，提取浓度低
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wc卫成

铁虫 (小有名气)

[交流] pMG36e质粒，提取浓度低已有2人参与

看文献上，别人用的DH5A，但是我用50ml过夜培养的菌液，提出的质粒浓度还是很低，想把质粒浓度提高到200ng/ul，还怎么做，换宿主菌吗，有推荐的吗

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1楼2022-08-07 12:58:43
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乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
dh5a就是高拷贝菌株 换个试剂盒或者优化提质粒操作

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我思故我在
2楼2022-08-07 14:13:54
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wc卫成

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 乌克兰跑男 at 2022-08-07 14:13:54
dh5a就是高拷贝菌株 换个试剂盒或者优化提质粒操作

我用的是生工质粒提取试剂盒的，5ml分别裂解后。离心取上清过同一个柱子，

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3楼2022-08-07 14:47:57
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乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by wc卫成 at 2022-08-07 14:47:57
我用的是生工质粒提取试剂盒的，5ml分别裂解后。离心取上清过同一个柱子，
...

看你菌液浓度了，可能是裂解液少了不完全，试剂盒上有一些solution可以翻倍加，eb洗脱重复一次

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我思故我在
4楼2022-08-07 17:05:58
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wc卫成

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 乌克兰跑男 at 2022-08-07 17:05:58
看你菌液浓度了，可能是裂解液少了不完全，试剂盒上有一些solution可以翻倍加，eb洗脱重复一次
...

不知道可能是试剂盒提的浓度低

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5楼2022-08-08 12:24:04
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司静Jing.

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以试一下：质粒转感受态过夜 挑单克隆继续分区划线（划密集一点） 待菌落成片长出后接种环刮菌泥溶于1.5ep的ddH2O中 然后试剂盒提质粒 最后用一个dna吸附柱吸附 可以很好的提高浓度~
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6楼2022-08-08 18:39:15
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