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zhu8534金虫 (正式写手)
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[交流]
考马斯亮蓝测定蛋白
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| 求助：考马斯亮蓝法测定发酵液中蛋白，里面的菌体会影响蛋白的测定吗？？还有：考马斯亮蓝G-250 100mg先溶于50mL95%乙醇中，加100毫升85%磷酸，去离子水稀释到1升，正式使用时还需要稀释吗？？ |
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zhu8534(金币+1):谢谢参与
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求助：考马斯亮蓝法测定发酵液中蛋白，里面的菌体会影响蛋白的测定吗？？还有：考马斯亮蓝G-250 100mg先溶于50mL95%乙醇中，加100毫升85%磷酸，去离子水稀释到1升，正式使用时还需要稀释吗？？ 1.菌体绝对会会影响蛋白的测定！菌体的吸收再各个波长都有，波长越短，干扰越大。应离心取上清。 2.建议在此之前，应作各种加量的发酵液空白的考染 吸光值 曲线。看看究竟有多大的干扰。 3.应作不同温度和不同pH下的考染 时的 蛋白质标准曲线。因为测定和读数时的pH 和温度变化 会极大地影响 染料的吸附，从而显著地影响最终读数。 不信，你试试 20℃ 和25℃的 读数。 4.发酵液的离子成份会影响考染读数，例如Mg Ca 等，发酵液的复杂程度影响有时很明显。 哈哈哈哈，复杂吧。  |
5楼2009-09-11 20:59:21
