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zhu8534

金虫 (正式写手)

[交流] 考马斯亮蓝测定蛋白

求助:考马斯亮蓝法测定发酵液中蛋白,里面的菌体会影响蛋白的测定吗??还有:考马斯亮蓝G-250 100mg先溶于50mL95%乙醇中,加100毫升85%磷酸,去离子水稀释到1升,正式使用时还需要稀释吗??
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绝对不要跟诱惑较劲!
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)


zhu8534(金币+1):谢谢参与
什么培养基
如果是复杂培养基干扰太大
3楼2009-09-11 20:37:07
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your2007

至尊木虫 (著名写手)


zhu8534(金币+1):谢谢参与
为什么不先离心后再测上清呢
爱人者被爱,敬人者人敬
4楼2009-09-11 20:52:21
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者


zhu8534(金币+1):谢谢参与
求助:考马斯亮蓝法测定发酵液中蛋白,里面的菌体会影响蛋白的测定吗??还有:考马斯亮蓝G-250 100mg先溶于50mL95%乙醇中,加100毫升85%磷酸,去离子水稀释到1升,正式使用时还需要稀释吗??


1.菌体绝对会会影响蛋白的测定!菌体的吸收再各个波长都有,波长越短,干扰越大。应离心取上清。

2.建议在此之前,应作各种加量的发酵液空白的考染 吸光值 曲线。看看究竟有多大的干扰。


3.应作不同温度和不同pH下的考染 时的 蛋白质标准曲线。因为测定和读数时的pH 和温度变化 会极大地影响 染料的吸附,从而显著地影响最终读数。 不信,你试试 20℃ 和25℃的 读数。

4.发酵液的离子成份会影响考染读数,例如Mg Ca 等,发酵液的复杂程度影响有时很明显。

哈哈哈哈,复杂吧。
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
5楼2009-09-11 20:59:21
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liujunhero

新虫 (文学泰斗)

文献杰出贡献文献杰出贡献


zhu8534(金币+1):谢谢参与
菌体肯定会影响的啊
不需要稀释的
6楼2009-09-11 21:13:24
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