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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助关于PCR
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助关于PCR

有一个序列GC含量太低，故设计出的引物的Tm值都在40度过一点。不知是否可以正常P出来？如果不能有什么办法？
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1楼2009-09-11 09:53:56
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zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)
★
xuehu2008(金币+1,VIP+0):谢谢 9-13 08:45
退火温度太低的话不容易扩出来，非特异扩增很强
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4楼2009-09-11 18:31:13
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anik

银虫 (正式写手)
我知道高GC含量是比较难扩的，低GC含量无所谓的吧？
软件给的温度较低，你不放心的话可以做个TOUCHDOWN-PCR。。。
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2楼2009-09-11 10:37:24
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695

木虫 (职业作家)
应该 没什么呢，不妨设计个引物试试看，不行的话再采取策略
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3楼2009-09-11 15:34:38
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★
xuehu2008(金币+1,VIP+0):谢谢 9-13 08:44
没有关系吧，已知的序列？那就把引物设计的稍微长一点了
不知道楼主PCR是做什么用的，如果两侧需要加酶切位点的话，那加几个GC的保护碱基就是了。
没问题了，个人经验PCR主要是引物与模板的配对性好不好，退火温度什么的不是很关键的一般
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5楼2009-09-12 09:13:17
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