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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助关于PCR

有一个序列GC含量太低,故设计出的引物的Tm值都在40度过一点。不知是否可以正常P出来?如果不能有什么办法?
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anik

银虫 (正式写手)

我知道高GC含量是比较难扩的,低GC含量无所谓的吧?
软件给的温度较低,你不放心的话可以做个TOUCHDOWN-PCR。。。
2楼2009-09-11 10:37:24
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695

木虫 (职业作家)

应该 没什么呢,不妨设计个引物试试看,不行的话再采取策略
3楼2009-09-11 15:34:38
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zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)


xuehu2008(金币+1,VIP+0):谢谢 9-13 08:45
退火温度太低的话不容易扩出来,非特异扩增很强
4楼2009-09-11 18:31:13
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bioxixi

木虫 (著名写手)


xuehu2008(金币+1,VIP+0):谢谢 9-13 08:44
没有关系吧,已知的序列?那就把引物设计的稍微长一点了
不知道楼主PCR是做什么用的,如果两侧需要加酶切位点的话,那加几个GC的保护碱基就是了。
没问题了,个人经验PCR主要是引物与模板的配对性好不好,退火温度什么的不是很关键的一般
5楼2009-09-12 09:13:17
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

嗯哪 我试试看
6楼2009-09-13 08:45:27
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taork

金虫 (小有名气)


xuehu2008(金币+1,VIP+0):谢谢 9-14 17:10
以我的经验来说,你先设计小量实验,可用TaqPCR进行条件摸索,特别是温度选择。
然后再进行正常PCR。一般来说温度太低会造成非特异性扩增,但一般不会不出条带
7楼2009-09-13 09:12:02
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xuehu2008

铜虫 (正式写手)

谢谢大家捧场啊
8楼2009-09-14 17:10:39
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