应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助] 克隆cDNA出了问题。
81/1返回列表
查看: 727  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] [求助] 克隆cDNA出了问题。

我想请问一下，我提取总RNA之后，立即做反转录ｃＤＮＡ第一条链的合成，然后就PCR，我设计的引物是从起始密码子和终止子结束的！PCR有非特异性条带~~~但是有一条是和Marker的相应位置大小是一样的~我把它切下来回收后，测序居然是不对的？？？我想请问一下，是什么原因出错呢？？？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-09-11 09:26:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请问你的退火温度是多少？退火温度低，扩出来的非特异性就不好
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-09-11 09:28:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anik

银虫 (正式写手)
引物呢？特异性与否？
赞一下 回复此楼
3楼2009-09-11 10:39:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yxhan7113

金虫 (小有名气)
★
生命核心(金币+1,VIP+0):谢谢回帖交流 9-11 15:53
1. PCR选择合适的条件特别是退火温度，得到特异性的条带
2. 由于DNA自身会形成某些二级结构，在胶上显示的条带大小会和实际的大小有误差
赞一下(6人) 回复此楼
4楼2009-09-11 11:04:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
设计好的primer
gradient PCR 寻找合适的annealing T
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2009-09-11 13:37:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haosmile

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
应该需要提高退火温度吧
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2009-09-11 15:48:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

habio
7楼2009-09-11 15:57:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changes

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
设计的引物去NCBI比对过吗？不知该引物对应的基因表达丰度如何？
直接PCR扩增获得该基因可能比较难。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2009-09-11 16:32:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 erictan2046 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 4/200 2026-08-15 01:28 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:52 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 7/350 2026-08-15 00:40 by 4wMiSEwB6436
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 HFw0lei2R37i 2026-08-14 8/400 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +23 医学老男孩 2026-08-13 49/2450 2026-08-14 20:02 by zhaifei
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +5 Ldrop2023 2026-08-13 5/250 2026-08-14 18:48 by ssxclkj
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[论文投稿] 职称评审，求友友推荐见刊最快的期刊 +5 工厂打螺丝 2026-08-08 5/250 2026-08-14 11:03 by 玖戈弋
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 12/600 2026-08-13 23:20 by iwuli
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭