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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 【求助】金葡菌生物被膜的结晶紫半定量实验测得OD值很低
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8145

新虫 (小有名气)

[求助] 【求助】金葡菌生物被膜的结晶紫半定量实验测得OD值很低 已有1人参与

【求助】金葡菌生物被膜的结晶紫半定量实验测得OD值很低
小弟最近在做细菌生物被膜的实验，因为并不是生物专业，所以好多基础的问题都不太会。现在是半定量结晶紫染色的结果一直不明朗，还请各位大佬解答一下，结果配图。实验步骤如下：
1.将冻干粉金黄色葡萄球菌CMCC26003用复苏溶液溶解，吹打均匀后将其接种到TSA培养基上37℃过夜培养。
2.传代到第四代
3.将TSA培养基上的单个菌落（第四代）接种到TSB培养基上，50r/min，37℃，摇菌过夜
4.将菌液吸出，分次少量加入TSB溶液，取100ul到96孔板中，测吸光度结果，直到酶标仪结果为OD600=0.5（用平板计数法测得菌的浓度在109CFU/mL左右）
5.稀释到106 ，加200ul菌液到96孔板（聚苯乙烯，TC处理）中，37℃，静置培养24H。
6.将菌液吸出（颜色由刚开始的澄清变浑浊）后，用PBS缓冲液冲洗三次，晾干
7.加入200ul甲醇，固定30min后弃掉甲醇，用三蒸水清洗三次，晾干
8.加入200ul0.1%结晶紫溶液，染色15min，用三蒸水将多余染料清洗干净（清洗3-4次）晾干（这个时候效果就不好了，壁上几乎没有，底部若有如无）
9.加入200ul33%乙酸，静置1h后测OD595酶标仪结果，结果在0.08左右
文献中的酶标仪结果都是我结果的几倍，甚至是十几倍，染色后颜色也比我的深非常多。苦于这个结果太久，做到现在已经不知道该怎么改进实验了。今天又怀疑是TSB溶液的原因，我用的是青岛海博的胰酪大豆胨液体培养基（TSB）。跪求做过此种实验的大佬解答！
配图是刚染完色之后。

【求助】金葡菌生物被膜的结晶紫半定量实验测得OD值很低
微信图片_20220704152708.jpg
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1楼 2022-07-04 15:29:25
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8145

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liu5610372 at 2022-07-06 14:00:16
如果还有其他问题，也可以根据我的邮箱联系我...

老师您好，我已经把我的问题发到您的邮箱了！烦请您帮忙看一下！

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5楼2022-07-12 09:24:58
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liu5610372

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我当年研一的时候也是这样做了2个月
楼主可以参考这篇论文    百里香酚对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌作用机制，或者我的毕业论文，如果按照我的方法还做不出来我大概就知道原因了，可以联系我。
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8145
2楼2022-07-06 08:58:06
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8145

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by liu5610372 at 2022-07-06 08:58:06
我当年研一的时候也是这样做了2个月
楼主可以参考这篇论文    百里香酚对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌作用机制，或者我的毕业论文，如果按照我的方法还做不出来我大概就知道原因了，可以联系我。

好的！！我去做做看，谢谢您！

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3楼2022-07-06 09:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liu5610372

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 8145 at 2022-07-06 09:46:51
好的！！我去做做看，谢谢您！
...

如果还有其他问题，也可以根据我的邮箱联系我
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4楼2022-07-06 14:00:16
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