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s150535912

新虫 (著名写手)
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纯化了好多种蛋白，但是大部分的蛋白用nanodrop测的浓度和跑蛋白胶的量都对应不上，想问一下，有没有很好的蛋白定量方法，试过bsa，和考马斯亮蓝G250，定量效果都不太好

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1楼 2022-07-02 20:51:10
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pennchem

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全得对上就奇怪了， UV吸收主要看蛋白中有多少色氨酸，络氨酸和苯丙氨酸。先用软件计算消光系数，然后再用OD280的值来计算蛋白质浓度，准确度可以的。

BCA定量不准，这个是常有方法，先用BSA测试一下，看是否流程上有偏差？
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31楼2022-07-05 08:38:19
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s150535912

新虫 (著名写手)
啊，错了，是BCA

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7楼2022-07-02 21:07:33
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s150535912

新虫 (著名写手)
引用回帖:
31楼: Originally posted by pennchem at 2022-07-05 08:38:19
全得对上就奇怪了， UV吸收主要看蛋白中有多少色氨酸，络氨酸和苯丙氨酸。先用软件计算消光系数，然后再用OD280的值来计算蛋白质浓度，准确度可以的。

BCA定量不准，这个是常有方法，先用BSA测试一下，看是否流程 ...

好的，太感谢啦，说着是不同的蛋白，但是其实是不同氨基酸突变的突变体，消光系数应该差不太大

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35楼2022-07-06 11:26:50
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tzynew2楼
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