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s150535912

新虫 (著名写手)


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纯化了好多种蛋白,但是大部分的蛋白用nanodrop测的浓度和跑蛋白胶的量都对应不上,想问一下,有没有很好的蛋白定量方法,试过bsa,和考马斯亮蓝G250,定量效果都不太好

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全得对上就奇怪了, UV吸收主要看蛋白中有多少色氨酸,络氨酸和苯丙氨酸。先用软件计算消光系数,然后再用OD280的值来计算蛋白质浓度,准确度可以的。

BCA定量不准,这个是常有方法,先用BSA测试一下,看是否流程上有偏差?
31楼2022-07-05 08:38:19
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s150535912

新虫 (著名写手)


7楼2022-07-02 21:07:33
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s150535912

新虫 (著名写手)


引用回帖:
31楼: Originally posted by pennchem at 2022-07-05 08:38:19
全得对上就奇怪了, UV吸收主要看蛋白中有多少色氨酸,络氨酸和苯丙氨酸。先用软件计算消光系数,然后再用OD280的值来计算蛋白质浓度,准确度可以的。

BCA定量不准,这个是常有方法,先用BSA测试一下,看是否流程 ...

好的,太感谢啦,说着是不同的蛋白,但是其实是不同氨基酸突变的突变体,消光系数应该差不太大

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35楼2022-07-06 11:26:50
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tzynew2楼
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