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酸奶包

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 2012csc at 2022-06-29 21:31:47
后面是要做什么实验?酶切电泳胶回收完 为什么还要电泳?一定要把核酸搞没?

后面要做连接,但前段时间连接效率太低(几乎没有阳性结果),,用电泳结果来估计载体和目的片段的加液量
11楼2022-06-29 23:02:03
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酸奶包

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 2012csc at 2022-06-29 21:31:47
后面是要做什么实验?酶切电泳胶回收完 为什么还要电泳?一定要把核酸搞没?

后面做连接,用电泳结果来估计载体和目的片段的加液量
12楼2022-06-29 23:04:23
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酸奶包

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 2012csc at 2022-06-29 21:31:47
后面是要做什么实验?酶切电泳胶回收完 为什么还要电泳?一定要把核酸搞没?

连接

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13楼2022-06-29 23:06:21
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)

几ng/ul也能正常做下游的,我重组法做或者酶连,都能做出来

发自小木虫Android客户端
14楼2022-06-29 23:38:13
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2012csc

至尊木虫 (知名作家)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 酸奶包 at 2022-06-29 23:02:03
后面要做连接,但前段时间连接效率太低(几乎没有阳性结果),,用电泳结果来估计载体和目的片段的加液量...

不是能测核酸浓度么

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坚持就是胜利!
15楼2022-06-30 00:31:42
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2012csc

至尊木虫 (知名作家)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 爆炒小木虫 at 2022-06-29 23:38:13
几ng/ul也能正常做下游的,我重组法做或者酶连,都能做出来

阳性少无所谓,是想要的克隆就行。

发自小木虫IOS客户端
坚持就是胜利!
16楼2022-06-30 00:32:45
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酸奶包

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 爆炒小木虫 at 2022-06-29 23:38:13
几ng/ul也能正常做下游的,我重组法做或者酶连,都能做出来

但是我的连接体系中载体至少要25ng,那我载体至少要加十几ul,但整个体系就20ul,就没办法保证了

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17楼2022-06-30 10:27:52
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030Selma

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 酸奶包 at 2022-06-29 21:09:40
酶切结束直接纯化?不用跑电泳看看切哪条带吗?
...

取一点看看,条带对的话剩下的纯化回收不就好了

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18楼2022-06-30 15:40:03
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爆炒小木虫

新虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by 酸奶包 at 2022-06-30 10:27:52
但是我的连接体系中载体至少要25ng,那我载体至少要加十几ul,但整个体系就20ul,就没办法保证了
...

不用,你直接缩体系就好了,你的情况我知道,照样几十个阳性克隆。

发自小木虫Android客户端
19楼2022-06-30 21:30:04
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嚯嚯哈嘿19

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酶切之前确定可以跑出条带吗?可以弄一个阳性对照看一下。如果的确有的话,可以试试酶切之后直接溶液回收以后再取样跑胶。如果只有一条带会不会是酶切下来的条带太小,直接跑胶跑出来了?胶的浓度也有点重要。可以弄一张图给大家看看具体分析
20楼2022-07-01 10:38:06
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