24小时热门版块排行榜    

查看: 2341  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

菜鸡咕噜

新虫 (初入文坛)

[交流] 研二菜鸡求助,感觉毕不了业了,求助 已有8人参与

我做的是小分子蛋白的表达,我质粒确认是转进去了的,我把诱导后的菌体拿去做了pcr,有正确的目的条带。但是破碎菌体后的蛋白没有抑菌活性,(该蛋白是一种抑菌的小分子肽)200bp左右,我的条件是 卡那霉素0.4mg/mL,IPTG是0.4mM,16℃200 rpm 16h,加诱导剂时的菌液OD600是0.6。我想问下这种问题出在哪里呀,感觉自己都毕不了业了。希望大家能给点建议吧,感谢各位!

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

菜鸡咕噜

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 花輪君 at 2022-06-27 08:34:35
蛋白没有活性也许是表达出的蛋白没有正确的功能折叠或者一些修饰?

可以问下,该怎么做才可以正常表达

发自小木虫Android客户端
3楼2022-06-27 10:25:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

花輪君

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
蛋白没有活性也许是表达出的蛋白没有正确的功能折叠或者一些修饰?

发自小木虫IOS客户端
2楼2022-06-27 08:34:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

花輪君

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 菜鸡咕噜 at 2022-06-27 10:25:14
可以问下,该怎么做才可以正常表达
...

不知道你这个蛋白是完全全新的还是说有类似报道但你们发现了未报道的活性,如果有已经报道的可以试下别人做过的载体,如果是全新的可以尝试多做几种表达载体。我不是这个领域的,多和导师讨论一下可能好一些,有时候自己弄很容易陷入误区。

发自小木虫IOS客户端
4楼2022-06-27 21:20:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

流水青苔

木虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
PCR目的条带回收,拿去测序加以确认;确保破碎菌体回收的蛋白是目的蛋白且没有变性;抑菌蛋白和诱导的菌体有没有冲突等等可能问题和老师请教逐一排除。
5楼2022-06-28 10:55:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:17 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 06:43 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 06:13 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 10/500 2026-08-30 06:11 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 05:48 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 03:26 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 3/150 2026-08-30 02:22 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 01:45 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 基金不中,共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见