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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达囊膜糖蛋白需要去除跨膜域，将跨膜域两侧序列连接时是否要加连接肽
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虚谨清

新虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达囊膜糖蛋白需要去除跨膜域，将跨膜域两侧序列连接时是否要加连接肽

试验目的：原核表达病毒囊膜糖蛋白，制备多抗

前期研究：这个病毒囊膜糖蛋白目前没有别人做过表达的文献可以参考，也没有查到关于此蛋白结构的分析，原计划表达该蛋白全序列，但经过多次试验后发现该蛋白要么不表达、要么表达量过低，不足以进行后续试验

现状：对该蛋白序列进行分析，发现该蛋白n端存在17aa的信号肽，c端存在两个相邻的跨膜域，计划将前端信号肽和相邻的2段跨膜域删去后，将跨膜域前后的序列连到一起进行表达。
蛋白总长306aa，2段跨膜域在207aa-255aa

问题1：对于同一个蛋白，只是删去中间跨膜区，要进行表达时其前后段的序列之间是否需要添加连接肽？将添加和不添加连接肽的序列进行蛋白质结构预测，以此来判断是否添加，这样分析可行吗？

问题2：如果添加连接肽，可以使用soe-pcr的方法对两个片段进行连接吗？还是有更好的方法呢？@biostar2009@wizardfan
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1楼 2022-06-21 17:35:23
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李高明

金虫 (著名写手)

自信的你
你尝试过换换表达载体了吗？

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风雨再猛烈，也要一步一步向前走。
2楼2022-06-21 19:03:00
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虚谨清

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 李高明 at 2022-06-21 19:03:00
你尝试过换换表达载体了吗？

换过实验室有的pET系列的几种、pGEX-6P-1了，表达菌株也用过BL21（DE3）、Rosetta
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3楼2022-06-21 19:47:36
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