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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 温敏质粒
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【悬赏金币】回答本帖问题，作者Prince小王子将赠送您 15 个金币

Prince小王子

新虫 (初入文坛)

[求助] 温敏质粒 已有1人参与

各位大神，本人正在使用温敏质粒（pset4s）进行基因敲除，转化过后无论在37℃还是40℃，温敏质粒都无法丢失。有没有大神遇到这种情况，该如何解决呢。
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1楼 2022-06-01 14:17:22
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lucklizhen

新虫 (正式写手)
一直做稀释方法看看吧。
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5楼2022-06-02 11:11:10
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普通回帖

yugege2009

至尊木虫 (知名作家)
做分子育种？

发自小木虫Android客户端
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2楼2022-06-01 14:43:05
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Prince小王子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yugege2009 at 2022-06-01 14:43:05
做分子育种？

只是单纯的敲除基因，构建缺失株
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3楼2022-06-01 15:04:17
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隐约

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是怎么知道没有丢失的？用的点板方法？
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4楼2022-06-02 09:36:32
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画画的bb

铁虫 (初入文坛)
我这边可以直接做细胞株的
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15371815028
6楼2022-06-02 14:46:08
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forhighbio

捐助贵宾 (著名写手)
pset4s是一种温敏基因敲除质粒，一般用来做链球菌的基因敲除。

发自小木虫Android客户端
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7楼2022-06-04 15:29:54
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Prince小王子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 隐约 at 2022-06-02 09:36:32
你是怎么知道没有丢失的？用的点板方法？

因为质粒上带有抗性基因，无论在37℃还是40℃培养后，在抗性平板上都能够生长。
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8楼2022-06-06 19:55:17
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Prince小王子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by forhighbio at 2022-06-04 15:29:54
pset4s是一种温敏基因敲除质粒，一般用来做链球菌的基因敲除。

对的，我就是打算敲除链球菌基因的
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9楼2022-06-06 19:56:49
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Prince小王子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lucklizhen at 2022-06-02 11:11:10
一直做稀释方法看看吧。

我尝试过一直稀释，但是需要连续稀释好多次才能够将质粒丢失，而成功丢失的菌也都变成野生型，基因无法敲除。我也试过转空载体（不加敲除基因同源臂），空载体转化后，在37℃或40℃培养一代就能丢失。
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10楼2022-06-06 20:00:34
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