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[求助]
求助！金葡电转化一直不成功，请各位大侠指教！
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最近做金葡电转化一直转不进去，制备感受态是用0.5M蔗糖溶液，菌液OD值从0.6降到0.3到0.25都试过了，用的电转条件是仪器自带的金葡电转程序电压2.9kV，也试了2.5kV，都没有转成功过。请各位大侠指点，感激不尽！ @天使托 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2022-06-06 20:06:15
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解决了，虽然电转率不高，但是也算转进去了。 感受态制备： 1、将菌液（100mL）培养至OD600=0.25左右，冰浴30分钟 2、5000rpm离心10min，弃上清 3、用等体积0.5M蔗糖溶液重悬沉淀，冰浴5min，4℃，5000rpm离心10min，弃上清 4、用1/2体积0.5M蔗糖溶液重悬沉淀，冰浴5min，4℃，5000rpm离心10min，弃上清 5、用1/5体积0.5M蔗糖溶液重悬沉淀，冰浴5min，4℃，5000rpm离心10min，弃上清 6、用1/50体积0.5M蔗糖溶液重悬沉淀，冰浴5min，4℃，5000rpm离心10min，弃上清 7、用适量(500ul)0.5M蔗糖溶液重悬沉淀，分装为50ul一管，-80℃冰箱储存。 电转 50ul感受态金葡+3/5/7ul质粒电转化，条件用的是伯乐电转仪自带的金葡电转程序（2900V，100欧，25uF) 电转结果质粒浓度高的，长出来的单菌落会多一些。 希望对您有点帮助。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2022-06-06 22:44:51