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songe0310木虫 (著名写手)
傻~傻得没得说的~
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金币求助，过柱
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现准备装一个内径10cm的硅胶柱，有几个问题想请教一下： 1、准备上样干膏25g，拌样后50g左右，内径10cm是否合适？ 2、径高比1：8~10是什么？是装柱后柱子内径与硅胶高度的比例吗？ 3、如选择内径10cm的柱子，装柱硅胶高度大概是多少？是80~100cm，这好像不太合适吧，计算一下用的硅胶量太大了 4、如果上样高度1cm，装柱硅胶高度大概多少？ 5、内径10cm的柱子，湿法上样好还是干法上样好，湿法上样要加脱脂棉、玻璃球吗？ 6、粗分一般设几个梯度？梯度的筛选跑板如何确定？ 新手弱弱的问 感谢回帖 [ Last edited by songe0310 on 2009-9-9 at 14:13 ] |
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2楼2009-09-09 10:03:09
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| 50g的样至少应该用装柱后十倍的高度的硅胶 可以大概看下高度 克数不是严格限定的;一般大柱子用干法比较省溶剂，不过看你用的什么洗脱剂了，有的易挥发的在天热的时候很容易花柱影响效果，所以一般不是特别大的我们还是用湿法装好；是说下面的脱脂棉吗，这个和干法湿法关系不大啊，看个人习惯了，我们一般都加，然后顶上洒硅胶或海砂防止液体砸坏样品层；梯度的设置也不是限定的 看你要哪些东西了，根据你要分得的东西在薄层上的状态来选，虽说粗分但还是能得到最好啊，薄层比例不能照搬到柱子上就得到板上的效果。 |
3楼2009-09-09 13:23:56
quiet510
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这些问题都是要你自己来实验回答的，没人能告诉你。 要注意的问题很简单，就是如下： 1.你的25g硅胶最大上样量多少要估算一下，保证上样不要超过最大上样量即可。不用管它多高。。 2.要保证能至少用三倍柱体积冲洗每个部位。这就和你的硅胶量和柱内径有关了，但是最好保证三倍柱体积的流动相能完全承载在柱子里，否则就要两次加流动相，麻烦又容易破坏顶层硅胶已形成的稳定状态。 3.分几个梯度要看你分什么了。只要保证最后那个组分流出来后，硅胶里基本没有什么化合物就行了。这个你可以用HPLC检测 PS：过柱子需要你摸索的，只有经验，没什么现成理论可谈的。不要太在意那些数字，多去想想为什么 |
6楼2009-09-09 14:13:59
springsheep
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