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酵母 蛋白提取 三氯乙酸 丙酮 western blot
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| 最近在做酿酒酵母自噬相关的课题，在酵母蛋白提取这方面有些不明白的地方，希望能够能到大神的解答。文献中描述获得2OD 酵母细胞后，离心去上清，加入500uL 10%的三氯乙酸沉淀蛋白，之后用预冷的1mL丙酮洗涤两次，离心去上清风干蛋白颗粒后加入100uL上样缓冲液重悬蛋白，再加入等体积的酸洗玻璃珠涡旋三分钟后煮样，想知道丙酮洗涤的目的是去三氯乙酸吗？加入酸洗玻璃珠的目的是什么呢？用这样处理的蛋白样品做western blot 显色条带特别浅，文献里的图条带很清晰很漂亮，但是我的每张照片的曝光时间都在1分钟左右，也不知道是什么原因导致的。 |
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tevejdey
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