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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助]提取总RNA必须要用多少pH值的苯酚??
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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] [求助]提取总RNA必须要用多少pH值的苯酚??

提取总RNA用多少pH值的苯酚????????
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1楼 2009-09-08 22:40:36
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
★
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？？？不是只用TRIZOL,氯仿，异丙醇，75%乙醇，RNase-free water就行了吗？还要用苯酚吗？
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砖石王老三！！！
2楼2009-09-08 22:43:36
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djrhewc

银虫 (小有名气)
我们好像也没用到...
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3楼2009-09-08 22:52:28
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
★
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我们提RNA是用的试剂盒，好像里面也没有苯酚。就是有裂解液，洗脱液，漂洗液等等，问起来好像没有。我记得的具体的就是用乙醇来沉淀，还有用RNAse-free水溶解。
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4楼2009-09-09 09:41:31
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
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NaAc饱和酚，pH4.5，酸性环境是抽提RNA必须的，过酸又会导致RNA酸水解，使用酸酚抽提，在加入氯仿涡旋后离心，RNA处于微酸性的水相，DNA和蛋白质被压在两相之间（如果两相你都不知道，那基础太差，找本分子克隆来see吧），如果上层水相呈碱性，DNA会混在RNA之间
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5楼2009-09-09 10:15:20
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erictan2046

铜虫 (正式写手)

我知道实验失败的原因了。我是楼主

谢谢各位虫友，原来！我之前用的苯酚是pH7.8~8.0提取DNA的，原本以为这样没有差别，但是这点就出错了！我老是做来做去做不出东西来！还真的不知道呀！枪头什么都用DEPC处理了，但是还是不行~我觉得没理由啊~想来想去苯酚出问题了！

[ Last edited by erictan2046 on 2009-9-9 at 20:03 ]
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6楼2009-09-09 10:21:57
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erictan2046

铜虫 (正式写手)

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[ Last edited by erictan2046 on 2009-9-9 at 20:36 ]
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7楼2009-09-09 20:13:08
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