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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] [求助]提取总RNA必须要用多少pH值的苯酚??

提取总RNA用多少pH值的苯酚????????
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)


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???不是只用TRIZOL,氯仿,异丙醇,75%乙醇,RNase-free water就行了吗?还要用苯酚吗?
砖石王老三!!!
2楼2009-09-08 22:43:36
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djrhewc

银虫 (小有名气)

我们好像也没用到...
3楼2009-09-08 22:52:28
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linxi8579

铜虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我们提RNA是用的试剂盒,好像里面也没有苯酚。就是有裂解液,洗脱液,漂洗液等等,问起来好像没有。我记得的具体的就是用乙醇来沉淀,还有用RNAse-free水溶解。
4楼2009-09-09 09:41:31
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gastrodia

金虫 (正式写手)


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NaAc饱和酚,pH4.5,酸性环境是抽提RNA必须的,过酸又会导致RNA酸水解,使用酸酚抽提,在加入氯仿涡旋后离心,RNA处于微酸性的水相,DNA和蛋白质被压在两相之间(如果两相你都不知道,那基础太差,找本分子克隆来see吧),如果上层水相呈碱性,DNA会混在RNA之间
5楼2009-09-09 10:15:20
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erictan2046

铜虫 (正式写手)

我知道实验失败的原因了。我是楼主

谢谢各位虫友,原来!我之前用的苯酚是pH7.8~8.0提取DNA的,原本以为这样没有差别,但是这点就出错了!我老是做来做去做不出东西来!还真的不知道呀!枪头什么都用DEPC处理了,但是还是不行~我觉得没理由啊~想来想去苯酚出问题了!

[ Last edited by erictan2046 on 2009-9-9 at 20:03 ]
6楼2009-09-09 10:21:57
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erictan2046

铜虫 (正式写手)

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[ Last edited by erictan2046 on 2009-9-9 at 20:36 ]
7楼2009-09-09 20:13:08
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