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新虫 (小有名气)

[求助] 关于野生菌基因敲除,质粒转进去后不发生重组已有1人参与

在做野生菌的一个功能验证,需要对其某个基因进行敲除,分别用了pre112自杀质粒和pDS132自杀质粒构建了敲除载体,质粒可以电转进去,已经在抗性平板上生长,但是挑斑检测要敲的基因还在,没有发生重组。请问这是咋会呢。。已经做了3个多月了,还是没啥进展,麻烦各位给分析分析,,谢谢
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liu5610372

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你应该是利用重圆重组的方法吧。这个方法的效率很低,半年能做出来都是快的,做个一年都很正常。你敲的是哪个菌?电转,应该是阳性菌,本来就难敲
2楼2022-05-28 21:00:07
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新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liu5610372 at 2022-05-28 21:00:07
你应该是利用重圆重组的方法吧。这个方法的效率很低,半年能做出来都是快的,做个一年都很正常。你敲的是哪个菌?电转,应该是阳性菌,本来就难敲

是从肠道里分离的一株野生菌,属于阴性厌氧菌
3楼2023-06-02 17:28:38
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