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小猫三两只

金虫 (正式写手)

[交流] 三酶切

实验方案:目的基因连到T载体后,再双酶切连到表达载体上
但目的基因与T载体的片段大小差不多,回收时不好区分,为解决这一问题,见有虫友提议用三酶切的方法将T载体切碎

想问一下,三酶切的酶是如何选择的?是不是其中的两个是目的基因两端的酶,另外一个是T载体上的,但是T载体上的酶不是都在MCS上吗,切开后应该不太会影响到T载体的长度吧,那不还是不好区分吗

呵呵,不知说清楚没!!

[ Last edited by 350784478 on 2009-9-21 at 13:57 ]
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
T在上除了MCS还有一些另外的酶切位点。
Thank-you,so-blue.
4楼2009-09-07 22:38:12
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
小猫三两只(金币+2,VIP+0):谢谢 9-7 22:18
1、可以直连表达载体啊~难道遇到很特殊的位点?
2、切碎的意思是位于MCS之外的酶切,只要T切碎了变成小片段而目的基因不会被切断,就区分出来了
2楼2009-09-07 22:03:01
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小猫三两只

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-9-7 22:03:
1、可以直连表达载体啊~难道遇到很特殊的位点?
2、切碎的意思是位于MCS之外的酶切,只要T切碎了变成小片段而目的基因不会被切断,就区分出来了

1直接连了好多次,没连上,才想到往T载体上连的
2那我再找找看有没有合适的酶切位点了
3楼2009-09-07 22:20:13
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greatwall8596


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
为什么要先连到T载体上?
5楼2009-09-07 23:18:32
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