24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
查看: 964  |  回复: 3
【悬赏金币】回答本帖问题,作者蚝油生菜将赠送您 20 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

蚝油生菜

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达 SDS-PAGE只有两三条非常浅的条带已有1人参与

做的是一种蛋白酶的原核表达,表达载体为pet28a,宿主细胞为bl21(de3)。摇菌至od=0.6左右时加入浓度为0.8mm的iptg,37℃诱导4h,超声破碎至澄清离心取上清液加buffer,100℃煮沸5min,然后跑sds-page几乎没有条带,只有两三条很浅的带,和师兄同一块胶跑的,其他的泳道都能跑出来,求解是出了什么问题

[ Last edited by 蚝油生菜 on 2022-4-23 at 10:16 ]
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蚝油生菜

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ScortRB at 2022-04-24 16:53:34
诱导的温度可能高了,看看参考文献别人多少度诱导的...

诱导温度37度会导致里面的天然蛋白跑不出来吗,我晚点试试把这些都跑一下
4楼2022-04-25 08:43:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

ScortRB

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
蚝油生菜: 金币+10, 有帮助 2022-04-26 20:32:03
菌体、沉淀、上清分别跑一下看看,有没有可能是包涵体或者其他不溶情况
2楼2022-04-24 16:52:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ScortRB

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by ScortRB at 2022-04-24 16:52:19
菌体、沉淀、上清分别跑一下看看,有没有可能是包涵体或者其他不溶情况

诱导的温度可能高了,看看参考文献别人多少度诱导的
3楼2022-04-24 16:53:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
信息提示
请填处理意见