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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 蛋白表达 SDS-PAGE只有两三条非常浅的条带
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蚝油生菜

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白表达 SDS-PAGE只有两三条非常浅的条带 已有1人参与

做的是一种蛋白酶的原核表达，表达载体为pet28a，宿主细胞为bl21（de3）。摇菌至od=0.6左右时加入浓度为0.8mm的iptg，37℃诱导4h，超声破碎至澄清离心取上清液加buffer，100℃煮沸5min，然后跑sds-page几乎没有条带，只有两三条很浅的带，和师兄同一块胶跑的，其他的泳道都能跑出来，求解是出了什么问题

[ Last edited by 蚝油生菜 on 2022-4-23 at 10:16 ]
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1楼 2022-04-22 10:43:15
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ScortRB

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
蚝油生菜: 金币+10, ★有帮助 2022-04-26 20:32:03
菌体、沉淀、上清分别跑一下看看，有没有可能是包涵体或者其他不溶情况
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2楼2022-04-24 16:52:19
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ScortRB

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by ScortRB at 2022-04-24 16:52:19
菌体、沉淀、上清分别跑一下看看，有没有可能是包涵体或者其他不溶情况

诱导的温度可能高了，看看参考文献别人多少度诱导的
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2022-04-24 16:53:34
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蚝油生菜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by ScortRB at 2022-04-24 16:53:34
诱导的温度可能高了，看看参考文献别人多少度诱导的...

诱导温度37度会导致里面的天然蛋白跑不出来吗，我晚点试试把这些都跑一下
赞一下 回复此楼
4楼2022-04-25 08:43:11
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