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铜虫 (小有名气)

[交流] 【交流/求助】关于全长序列引物设计

用RACE扩增出5'端片段和3'端序列,拼接后得到全长序列,怎么设计扩增全长序列的引物,是从阅读框两端设计,还是从全长序列起始端(非编码区域内)设计?请各位指点一下,谢谢
补充:用软件拼接后cDNA序列(包括5'UTR、编码框、3'UTR)如果从编码框两端 设计引物,那么缺少非编码区的序列对转基因的表达有影响没有?

[ Last edited by amisking on 2009-12-9 at 18:00 ]
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★
新用户名(金币+5,VIP+0):谢谢 9-7 22:47
如果只是要做功能鉴定,设计引物时上游从ATG开始即可,下游引物从TAG或TAA开始即可,两端最好加上克隆到表达载体的酶切点,引物长度可以控制在25bp左右退火温度也稍高一些,可以提高RTPCR扩增的特异性
4楼2009-09-07 20:40:47
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695

木虫 (职业作家)


新用户名(金币+1,VIP+0): 12-9 17:57
友情帮顶,我过段时间也要开始这项工作了
2楼2009-09-07 19:31:23
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flamingdog1982

木虫 (小有名气)


新用户名(金币+1,VIP+0): 12-9 17:57
如上,与楼主后续实验目的有关。
一直认为,没有最好,只有更好!
6楼2009-09-07 21:23:02
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zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
新用户名(金币+2,VIP+0): 12-9 17:58
那要看你得到序列的目的是什么,如有比较成熟的表达体系可以只要CDS区
9楼2009-09-08 17:16:53
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