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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【交流/求助】关于全长序列引物设计
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铜虫 (小有名气)

[交流] 【交流/求助】关于全长序列引物设计

用RACE扩增出5'端片段和3'端序列，拼接后得到全长序列，怎么设计扩增全长序列的引物，是从阅读框两端设计，还是从全长序列起始端（非编码区域内）设计？请各位指点一下，谢谢
补充：用软件拼接后cDNA序列（包括5'UTR、编码框、3'UTR）如果从编码框两端 设计引物，那么缺少非编码区的序列对转基因的表达有影响没有？

[ Last edited by amisking on 2009-12-9 at 18:00 ]
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春天 把老 婆种 下， 秋天 就能 收获 很多 老婆 (*^__^*)
1楼 2009-09-07 11:36:28
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695

木虫 (职业作家)
★
新用户名(金币+1,VIP+0): 12-9 17:57
友情帮顶，我过段时间也要开始这项工作了
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2楼2009-09-07 19:31:23
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amisking

荣誉版主 (文坛精英)

优秀区长优秀版主
★
新用户名(金币+1,VIP+0): 12-9 17:57
那我也顶个！
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如果没有人帮助你，那么你就去帮助别人。
3楼2009-09-07 19:32:34
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
新用户名(金币+5,VIP+0):谢谢 9-7 22:47
如果只是要做功能鉴定，设计引物时上游从ATG开始即可，下游引物从TAG或TAA开始即可，两端最好加上克隆到表达载体的酶切点，引物长度可以控制在25bp左右退火温度也稍高一些，可以提高RTPCR扩增的特异性
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4楼2009-09-07 20:40:47
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superyuanjia

至尊木虫 (著名写手)
期待答案
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5楼2009-09-07 21:09:30
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flamingdog1982

木虫 (小有名气)
★
新用户名(金币+1,VIP+0): 12-9 17:57
如上，与楼主后续实验目的有关。
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一直认为，没有最好，只有更好！
6楼2009-09-07 21:23:02
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xld1984
支持！
7楼2009-09-07 21:27:19
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铜虫 (小有名气)
继续请教各位
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春天 把老 婆种 下， 秋天 就能 收获 很多 老婆 (*^__^*)
8楼2009-09-08 13:41:14
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zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
新用户名(金币+2,VIP+0): 12-9 17:58
那要看你得到序列的目的是什么，如有比较成熟的表达体系可以只要CDS区
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9楼2009-09-08 17:16:53
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xulu2008

金虫 (正式写手)
我也想知道，等一下
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10楼2009-09-08 21:04:54
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