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zhouzhou_3006木虫 (著名写手)
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[交流]
大肠杆菌电转遇到的问题
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| 我是用重组系统进行大肠杆菌的基因敲除，用的辅助性质粒是PKD46和PCP20，基因已经成功的敲除了，为了消除抗生素抗性，需要电转PCP20，但电转了4，5次了，都没成功，真的郁闷死了，以前电转PKD46和重组片段时也没这么波折，不知道PCP20是不是有什么特殊的电转条件？感受态都是新制备的，菌浓不是太高，50 ml的菌液离心后，用水洗了两次，10%甘油洗一次，10%甘油 500 ul 溶解后分装。电转时50 ul感受态加了不同浓度的质粒，5，6，7，8，9，10 ul。质粒也是一星期之内提取的，跑电泳后发现条带不是很亮。电转条件是2.5 KV，2 mm的电转杯。 不知道问题是出在哪里了？ |
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