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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求大家帮我分析一下RNA电泳图和PCR产物电泳图
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wanghong-0714

木虫 (正式写手)

[交流] 求大家帮我分析一下RNA电泳图和PCR产物电泳图

大家好
这是我提取的水稻和飞虱的RNA电泳图谱，120V电泳20min
最左边的和最右边的为Marker。从左向右泳道1，2，4，5，6，7为水稻RNA 泳道3为飞虱（一种昆虫）的RNA，OD值测定为1.3多，这样的RNA质量可以吗？可以做RT-PCR吗

[ Last edited by amisking on 2009-9-6 at 15:29 ]
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1楼 2009-09-06 15:08:48
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wanghong-0714

木虫 (正式写手)

纠正

上面的是RT-PCR电泳图谱，没有得到目的片段，目的片段是445bp，请大家帮忙分析是怎么回事？
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2楼2009-09-06 15:12:52
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changes

木虫 (正式写手)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 9-6 17:28
原因比较多吧，引物是否合适、模板是否完整、体系是否合理？？
建议先利用内标基因引物先扩增下cDNA模板。
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3楼2009-09-06 16:50:12
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like8866

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果RNA的质量没问题，很可能是反转没成功，检查一下体系。
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4楼2009-09-06 19:29:19
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aqi96

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
350784478(金币+1,VIP+0):谢谢交流 9-7 07:31
从marker来看，电泳系统没有问题。
最大的问题就是：反转录出问题了。重新做一次反转录，加个阳性对照。这样可以判断是否RNA的问题。
到了PCR这一步，再加个阳性对照，判断是否cDNA的问题。

这样，基本就搞定了。
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做最好的自己
5楼2009-09-07 00:00:41
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wanghong-0714

木虫 (正式写手)
请教各位高手
反转录时用什么做阳性对照，什么做阴性对照，来判断反转录是否成功？
如何得到阳性和阴性对照？
RT-PCR进行PCR扩增时又用什么阳性对照影星对照呢？如何获得阳性和阴性对照呢？来判断PCR是否成功？
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6楼2009-09-07 12:38:32
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pumas2006

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你确定你的RNA质量没问题吗？
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7楼2009-09-07 14:00:11
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
电泳图最前沿的条带是不是说明引物二聚体啊。并且根据前面的帖子RNA不是有问题吗，我想应该重做一下试试。
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8楼2009-09-07 16:09:47
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speker

铁虫 (初入文坛)

RNA

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的RNA是否太差了啊，都没有带，而且这么模糊，建议重提一次，省的浪费酶啊！
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9楼2009-09-08 12:58:43
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