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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于PCR问题求助
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lili1130

[交流] 关于PCR问题求助

为什么做PCR时，用的是同一种CDNA模板，同样的引物，同样的反应程序，同样反应体系，之前能PCR出目的片段，现在老是一无所获？
很着急，大家能给点建议吗？
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1楼 2009-09-05 15:17:18
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zjwang

木虫 (正式写手)
★
lili1130(金币+1,VIP+0): 9-7 08:25
cDNA降解？
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2楼2009-09-05 15:27:01
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
★
lili1130(金币+1,VIP+0): 9-7 08:25
我遇到过，估计你的引物被污染了，重新合成引物试试。
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砖石王老三！！！
3楼2009-09-05 17:17:30
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jack6335

铁杆木虫 (正式写手)
★
lili1130(金币+1,VIP+0): 9-7 08:25
我遇到过，估计你的引物被污染了，重新合成引物试试。
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砖石王老三！！！
4楼2009-09-05 17:17:51
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★
lili1130(金币+2,VIP+0): 9-5 18:35
cDNA之制备后最好赶快用掉，在-20冰箱存放一般不要超过一个月，引物反复冻融或存放时间太长也会出现问题，建议你用此模板，使用其他的引物如18sRNA看看能否扩出条带，如果不行，那就是模板不行，如果可以那就换引物，当然还有可能是你的酶出问题了，换个酶试试，想知道结果就一步步排查，做几个重复，把酶，缓冲液，模板，引物，PCR水都换一遍，每个重复只换其中一个，然后在同样的反应程序，同样反应体系进行扩增，就可以找出问题之所在
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5楼2009-09-05 17:44:09
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changes

木虫 (正式写手)
★
lili1130(金币+1,VIP+0): 9-7 08:25
引用回帖:
Originally posted by lili1130 at 2009-9-5 15:17:
为什么做PCR时，用的是同一种CDNA模板，同样的引物，同样的反应程序，同样反应体系，之前能PCR出目的片段，现在老是一无所获？
很着急，大家能给点建议吗？

最好能具体点，有图片吗？
若是检测时点样空下面什么也没有的话？建议换PCR扩增的所有药剂（buffer、dNTPs、Taq、水、引物）。
若是有条带但是弥散或是非目的条带，建议调整下Tm值、模板量。
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6楼2009-09-05 20:40:44
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tingdandan

铁虫 (初入文坛)
可能是引物污染了，我做的也是这样，重新换引物
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7楼2009-09-08 13:44:25
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nql_sdau

银虫 (小有名气)
引物污染！我原来引物都不分装！这种状况是经常出现啊！！！
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8楼2009-09-08 13:54:20
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bclz

铁杆木虫 (正式写手)
是啊，楼上说的对，肯定是引物污染了，建议重新合成引物
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9楼2009-09-08 14:45:46
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zuodongyun

铁杆木虫 (正式写手)
我也遇到过这样的情况，不过变换一下退火温度又出来了，目前还不知道是什么原因，你可以试试
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10楼2009-09-08 17:13:22
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