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curevv

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助pet28a通用引物扩增问题 已有2人参与

小弟将重组质粒pet28a转到Dh5α后挑抗性平板上的菌在带抗性摇瓶里摇了后,用pet28a的通用引物t7和t7t去做菌液pcr,跑出来的条带有很多非特异性条带是为什么,也没有目的基因或者空载质粒应该在的条带。
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alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
建议lz用目的基因的特异引物做菌落PCR会更好些,个人感觉通用引物T7p和T7t的特异性并不是很好。
3楼2022-03-31 19:59:35
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查看全部 4 个回答

curevv

铁虫 (初入文坛)

用t7/t7t通用引物扩增的目的基因应该在1100bp左右,这个是dl2000的marker,从上往下依次是2k、1k、750、500、250、100,没有目的基因的条带,也没有空载理论上的300bp的条带。好奇怪
求助pet28a通用引物扩增问题
pet28a 通用引物扩增.png

2楼2022-03-29 20:00:03
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

引物特异性不好吧。我用的是自己改进的引物,提高Tm。
4楼2022-04-05 17:23:49
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