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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求助pet28a通用引物扩增问题
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curevv

铁虫 (初入文坛)

[求助] 求助pet28a通用引物扩增问题 已有2人参与

小弟将重组质粒pet28a转到Dh5α后挑抗性平板上的菌在带抗性摇瓶里摇了后，用pet28a的通用引物t7和t7t去做菌液pcr，跑出来的条带有很多非特异性条带是为什么，也没有目的基因或者空载质粒应该在的条带。
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1楼 2022-03-29 19:57:45
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curevv

铁虫 (初入文坛)
用t7/t7t通用引物扩增的目的基因应该在1100bp左右，这个是dl2000的marker，从上往下依次是2k、1k、750、500、250、100，没有目的基因的条带，也没有空载理论上的300bp的条带。好奇怪
求助pet28a通用引物扩增问题
pet28a 通用引物扩增.png
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2楼2022-03-29 20:00:03
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alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
建议lz用目的基因的特异引物做菌落PCR会更好些，个人感觉通用引物T7p和T7t的特异性并不是很好。
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3楼2022-03-31 19:59:35
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

引物特异性不好吧。我用的是自己改进的引物，提高Tm。
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4楼2022-04-05 17:23:49
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